近年来，细胞与基因治疗领域取得了突飞猛进的发展，据悉，全球有300多个基于AAV载体的临床项目正在开展，一般通过三质粒共转染制成；有近千个 CAR-T的临床试验正在开展，多数通过慢病毒载体转导CAR，慢病毒载体一般通过四质粒的瞬转来进行生产。基于此，市场对GMP质粒的需求也在不断上升。
传统的质粒生产避不开大肠杆菌的发酵，在商业化生产过程中会遇到一些挑战，比如质粒上含有无关序列，如抗生素筛选基因、复制起始点等，影响质粒的产量；整个过程涉及发酵、提取、纯化、QC等多个环节，耗时长，成本高；此外，可能会发生大肠杆菌和质粒DNA的基因重组，造成安全性事件。

体外酶法合成DNA载体可以有效替代传统的质粒DNA生产，完美避开生物发酵过程的诸多不可控风险，且生产工艺更简单可控，可在更短的时间内完成商业化生产，在细胞与基因治疗领域具有广泛的应用场景。恺佧生物基于独有的新型功能重组蛋白和高活性蛋白酶类研发生产平台SAMS^TM，开发出了一系列高活性的酶产品用于体外合成DNA载体。

phi29 DNA polymerase具有很强的链置换活性和连续合成的能力，在体外合成长的双链DNA。此外，该酶具有较强的 3’- 5’ 核酸外切酶活性，其保真性远高于绝大多数 taq 酶，确保了 DNA 合成的高保真性。

注:在某些应用场景下，使用此酶会有专利限制

TelN Protelomerase具有切割-连接活性，可用于合成线性闭合mini DNA载体，其在识别位点 TelRL（56bp）切割双链DNA，并在酶切位点处留下共价封闭的发夹结构，有效地将环状DNA转化为有发夹末端的线性DNA。在实际应用中会将质粒上的目的片段和骨架序列通过TelRL位点进行间隔。

注:TelRL底物序列需要专利授权

经TelN Protelomerase切割-连接形成的DNA载体有两类，一类含骨架序列，一类含目的片段。骨架序列上有相应的限制性酶切位点，恺佧生物提供高活性的限制性内切酶用于酶切骨架序列。

骨架序列经酶切后形成平末端或粘性末端，进一步经Exonuclease III或T5 Exonuclease消化，从而得到只有靶基因表达元件组成的末端闭合的线性DNA载体。