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基因编辑工具
· 基因编辑技术已历经几代革新，从最初的ZFNs(zinc-finger nucleases)技术、TALENs (transcription activator-like effector nucleases)技术到CRISPR-Cas技术，再到BE(base editing)技术及PE(prime editing)技术等，极大地提高了人类对真核细胞的基因组进行精准改造的能力，也为治愈各类疾病提供了可能。
· 由于设计和操作方面的便捷性，CRISPR-Cas系统成为当前应用最为广泛的基因编辑技术，此技术涉及到的核酸酶有Cas9、Cas9n、Cas12a和hfCas12Max®等，其中Cas9在PAM序列的上游3-4bp处切割DNA，Cas12a切割双链DNA后形成4-5个核苷酸突出的5’粘性末端；hfCas12Max®也以交错方式切割，形成5’粘性末端。
· BE技术是基于脱氨酶与CRISPR-Cas9系统融合形成的技术。主要有胞嘧啶碱基编辑器（CBE）、腺嘌呤碱基编辑器（ABE）等，可实现单个碱基对的转换。
恺佧生物隆重推出GMP级Cas9核酸酶以及高活性的AsCas12a和hfCas12Max®等一系列基因编辑酶！其中，Cas9核酸酶已完成DMF备案（编号：036578），并已协助客户完成IND申报。 若您使用恺佧生物Cas9核酸酶用于细胞与基因治疗项目的药物开发，在进行新药注册的监管备案文件中可直接引用我们的DMF 编号，从而加快药品审查。此外，我们还可提供科研级&GMP级CBE——BS-EP1(商品名：AccuBaseTM)，将C·G碱基对替换为T·A碱基对，实现基因的修正、激活、沉默等以达到治疗疾病的目的。
Cas9 Nuclease(GMP grade)
产品特点
质量要求
产品应用
在细胞与基因治疗领域，用于造血干细胞和免疫细胞的基因修饰
产品数据
01 纯度
SEC-HPLC
Fig. 1 SEC-HPLC检测Kactus Cas9核酸酶的纯度高于95%
RP-HPLC
Fig. 2 RP-HPLC检测Kactus Cas9核酸酶的纯度高于95%
02 活性
体外切割活性检测
Fig. 3 Cas9核酸酶体外切割DNA性实验，三批次的Cas9核酸酶的体外切割效率基本相当。
细胞水平活性检测
Fig. 4 Cas9核酸酶用于293T细胞、Jurkat细胞、T细胞的基因敲除，其在不同细胞中的基因敲除效率与竞品相当。
Cas9 (CRISPR Associated Protein 9) ELISA Kit
在ex vivo基因治疗中,细胞经CRISPR-Cas9系统改造后，在回输人体之前需对胞外或胞内Cas9核酸酶的残留进行检测。
恺佧生物精心开发了高灵敏的残留检测试剂盒Cas9 (CRISPR Associated Protein 9) ELISA Kit，其灵敏度可达0.125 ng/ml。
Fig. 5 Cas9 (CRISPR Associated Protein 9) ELISA Kit检测原理
Fig. 6 标准曲线绘制示例
01 准确度
稀释缓冲液中加样回收率检测
Fig. 7 在稀释缓冲液中检测三个不同浓度的Cas9核酸酶分析样本的回收率，结果显示回收率介于80%-120%，表明试剂盒在稀释缓冲液中检测Cas9核酸酶的准确度高。
02 精密度
使用同一批次检测高中低三种不同浓度的Cas9核酸酶样本，每个样本重复测试10次，结果显示每批次试剂盒检测不同浓度样本的CV都小于10%，表明试剂盒具有良好的批内重复性。
使用三批次剂盒检检测高中低三种不同浓度的Cas9核酸酶样本，共检测30次，结果显示每种样本三个批次间的CV值都小于15%，表明试剂盒具有良好的批间重现性。
AsCas12a Nuclease
产品数据
SEC-HPLC
Fig. 8 SEC-HPLC检测AsCas12a 核酸酶的纯度高于95%
体外切割活性
Fig. 9 经体外切割实验验证，AsCas12a 核酸酶可以靶向切割95%以上的底物。
hfCas12Max®
hfCas12Max®是辉大基因（HuidaGene）开发的新型的DNA基因编辑工具酶，恺佧生物获得hfCas12Max®在大中华区研究级蛋白的生产销售排他许可，以及GMP级产品的生产销售普通许可。hfCas12Max®是对xCas12i DNA编辑工具进行蛋白工程化改造、筛选及验证，开发出的高保真变体，相较传统的Cas9和Cas12，hfCas12Max®具有更宽泛的PAM识别和更高效的编辑效率，且相当或更低的脱靶效应。
产品数据
TIDE分析基因敲除效率
Fig.10 hfCas12Max® RNP电转CD3+ T细胞后，TIDE分析B2M和TRAC基因敲除效率均超过90%。
流式细胞术分析基因敲除效率
Fig. 11 经流式检测，由hfCas12Max® 介导的基因编辑系统可以高效地同时敲除CD3+ T细胞中的B2M和TRAC基因，双基因敲除效率超过90%。
BS-EP1(商品名：AccuBaseTM)——新型CBE
BS-EP1(商品名：AccuBaseTM)是通过基因工程手段设计的CBE，由 Cas9 Nickase、脱氨酶、UGI 融合而成，可以在 3-12 窗口范围内进行有效编辑(远离 PAM 的为第1位)，将窗口范围内的 C 脱氨形成 U，U利用细胞内修复机制转变为 T，从而实现C→T的转变，并且在编辑的过程中不会引入 DNA 双链断裂（Double-Strand Break，DSB），确保了编辑的安全性。
AccuBaseTM 的结构经过巧妙的设计，创造性地将脱氨酶可逆的包裹起来，只有当 sgRNA 与靶位点结合时才能发挥脱氨作用，大幅度降低了与非靶 DNA 的随机结合，可以实现接近零脱靶的效果，同时维持了高效的编辑活性。恺佧生物基于Structure Aided Design and Multiplex Screening SAMSTM平台，通过对AccuBaseTM蛋白的表达工艺、纯化工艺、制剂配方开发等一系列步骤的筛选和优化，最终制备出高稳定性、高纯度和高活性的CBE碱基编辑器。
AccuBaseTM 的结构经过巧妙的设计，创造性地将脱氨酶可逆的包裹起来，只有当 sgRNA 与靶位点结合时才能发挥脱氨作用，大幅度降低了与非靶 DNA 的随机结合，可以实现接近零脱靶的效果，同时维持了高效的编辑活性。恺佧生物基于Structure Aided Design and Multiplex Screening SAMSTM平台，通过对AccuBaseTM蛋白的表达工艺、纯化工艺、制剂配方开发等一系列步骤的筛选和优化，最终制备出高稳定性、高纯度和高活性的CBE碱基编辑器。
Fig. 12 AccuBaseTM工作示意图（左:未编辑状态 右:编辑状态）
产品数据
SEC-HPLC
Fig. 13 SEC-HPLC检测 AccuBaseTM纯度高于80%
TIDE分析编辑效率
Fig. 14 使用AccuBaseTM分别敲除原代T细胞的PDCD1, TRAC和B2M基因，经TIDE分析，AccuBaseTM对三个基因的敲除效率均超过80%。
流式细胞术分析编辑效率
Fig. 15 使用AccuBaseTM分别敲除原代T细胞膜上的PDCD1, TRAC和B2M基因，经流式分析，在蛋白水平上，AccuBaseTM对PD1和B2M的敲除效率超过80%，对TRAC的敲除效率达到96%。
产品列表
| 货号 | 产品名称 | 规格 | |
| KACTUS-CAS9 | Cas9 Nuclease | 1 mg/3 mg | 立即询价 |
| KACTUS-CAS9-GMP | Cas9 Nuclease (GMP grade) | 3 mg | 立即询价 |
| CAS-MM00B | Cas9 (CRISPR Associated Protein 9) ELISA Kit | 96 T | 立即询价 |
| CAS-EE111 | SpCas9 D10A Nickase | 1 mg | 立即询价 |
| CAS-EE121 | AsCas12a Nuclease | 1 mg | 立即询价 |
| CAS-EE128 | hfCas12Max® | 500 μg/1 mg | 立即询价 |
| KD-0001 | BS-EP1（Trade name: AccuBaseTM） | 200 μg/500 μg/1 mg | 立即询价 |
| GMP-KD-0001 | BS-EP1（Trade name: AccuBaseTM), GMP grade | 1 mg | 立即询价 |
